1.主題內容與適用范圍

1.1.主題內容

    本標準規定了測定水質急性毒性的測定發光細菌法 GB/T  15441-1995 的發光細菌法。

1.2.適用范圍

    本標準適用于工業廢水、納污水體及實驗室條件下可溶性化學物質的水質急性毒性監測。

2.方法提要

    基于發光細菌相對發光度與水樣毒性組分總濃度呈顯著負相關(P≤0.05),因而可通過生物發光光度計測定水樣的相對發光度,以此表示其急性毒性水平。

    水質急性毒性水平按8所述條件選用相當的參比毒物*濃度(以mg/L為單位)來表征,或選用EC50值(半數有效濃度一一以樣品液百分濃度為單位)來表征。

3.實驗步驟

3.1.菌種復蘇

   從冰箱2~5℃室取出含有0.2g發光細菌凍干粉西林瓶和氯化鈉溶液,投入置有冰塊的小號(1~1.5L)保溫瓶,用lml移液器吸取0.5ml冷的氯化鈉2%(g/100ml)(適用于5ml測試管) 或lml冷的氯化鈉2.5%(g/100ml)(適用于2ml測試管) 注入已開口的凍干粉西林瓶,務必充分混勻。2min后菌即復蘇發光(可在暗室內檢驗,肉眼應見微光),備用。

3.2.測定

3.2.1.室溫

室溫20~25℃。

同一批樣品在測定過程中要求溫度波動不越過±1℃。且所有測試器皿及試劑、溶液測前1h均置于控溫的測試室內。

3.2.2.pH

若須測定包括pH影響在內的急性毒性,不應調節水樣pH。

若須測定排除pH影響在內的急性毒性,須將水樣和CK(氯化鈉3g/100ml)pH測前調至下值:主要含Cu水樣為4.5,主要含其他金屬水樣為5.4,主要含有機化合物水樣為7.0。

3.2.3.溶解氧

本法只能測定包括溶解氧影響在內的急性毒性。

4.  測試結果表達

4.1.計算樣品相對發光度(%0,并算出平均值。

                     *管或樣品管發光量(mV)

相對發光度(%)=―――――――――――――― × 100%                       

                           CK管發光量(mV)

                          (平行1)%+(平行2)%+(平行3)%

相對發光度(%)平均值=――――――――――――――― × 100%               

                                        3

4.2.符合條件者,建立并檢驗*濃度(C)與其相對發光度(T)%均值的相關方程,也可以繪制關系曲線。

a.求出一元一次線性回歸方程的a(截距)、b(斜率、回歸系數)和r(相關系數),列出方程:T=a十bC*                                                              

查相關系數顯著水平(P值)表,檢驗所求r值的顯著水平。若P≤0.01,且EC50*=0.10±0.02mg/L,則所求相關方程成立;反之,不能成立,須重測系列*濃度的發光量。*溶液配制過夜者,須重配后再測定。

b.也可以據建立的上述方程繪制關系曲線。即指定發光度為10%和90%,代入上式,求出相應的二個*濃度,在常數坐標紙上,定出二點,畫一直線,即為符合該方程的*濃度與相對發光度的關系曲線。

4.3.符合條件者,建立并檢驗樣晶稀釋濃度(C)與其相對發光度(T)%均值的相關方程,繪制關系曲線.

按4.2所述方法建立相關方程T=a+bC樣,并檢驗相關系數r顯著水平〈P值〉。若P≤0.05,則所求相關方程成立;反之,不能成立,須重測樣品稀釋系列濃度的發光量。